Isolamento de células renais murinas: uma técnica para isolar e gerar cultura primária de células epiteliais tubulares renais

Para isolar células epiteliais tubulares renais ou TECs, comece pegando um rim de camundongo recém-isolado em uma placa de Petri. Retire a cápsula renal - a fina camada externa que envolve o rim - e remova a medula ou a parte mais interna do rim, deixando o córtex contendo o túbulo e as células epiteliais tubulares.

Pique as partes renais restantes em pedaços pequenos e incuba-as em um tampão de digestão quente contendo a enzima colagenase. A colagenase quebra a proteína de colágeno que mantém os tecidos renais juntos, liberando os túbulos renais e as células renais em suspensão.

Filtrar a suspensão para remover os tecidos renais não digeridos. Em seguida, adicione meios de cultura pré-resfriados ao filtrado. A temperatura mais baixa neutraliza a colagenase e interrompe a digestão dos tecidos. Centrifugue o filtrado em baixa velocidade para permitir que os túbulos mais densos e as células tubulares se assentem enquanto outros tipos de células e impurezas permanecem suspensos.

Remova essa fração sobrenadante indesejada e adicione meios de cultura para ressuspender o pellet. Semeie a suspensão em uma placa de cultura revestida de colágeno e incuba. As células tubulares livres se liga