Injeção hidrodinâmica da pelve renal: uma técnica para entregar DNA diretamente em células renais de modelo murino

Para entregar o DNA do plasmídeo diretamente nas células renais do camundongo, comece colocando um camundongo anestesiado em uma posição lateral. Prepare o mouse removendo o pelo dorsal do lado. Localize um local de incisão apropriado no flanco esquerdo, abaixo da caixa torácica.

Faça um pequeno corte na pele e nas camadas musculares subjacentes. Em seguida, aplique uma leve pressão na cavidade abdominal para expor o rim através do local da incisão. Remova parcialmente o tecido adiposo perineférgico sobreposto para visualizar a pelve renal.

Agora, pegue uma seringa contendo DNA de plasmídeo em um tampão de entrega hidrodinâmico. Insira a agulha diretamente na pelve renal - uma porção triangular e dilatada do ureter no rim. Injete a solução plasmidial rapidamente, de modo que o DNA atinja diretamente o parênquima renal - a parte funcional do rim que filtra o sangue.

A entrega rápida de grande volume de fluido através da pelve renal cria uma alta pressão, criando poros transitórios na membrana plasmática das células parenquimatosas renais. Isso facilita a entrada de plasmídeos nas células. Eventualmente, esses poros se fecham, prendendo os plasmídeos dentro das células.

Por fim, retr