Why does orthotopic implantation improve target validation in RCC?

Orthotopic implantation places cancer cells in the native kidney microenvironment, enabling physiologically relevant tumor-stroma interactions that better reflect human disease biology. This context-dependent growth improves confidence in target validation by revealing dependencies not evident in ectopic models. It supports mechanistic de-risking by capturing renal-specific signaling and metastasis patterns.

How does isolating the kidney as the injection site improve discovery pipeline fidelity?

Injecting cells directly into the kidney under intact peritoneum ensures accurate orthotopic engraftment, avoiding peritoneal seeding that can confound early tumor take measurements. This precision supports reliable quantification of primary tumor growth kinetics, a critical dependent variable in early efficacy screening. Reproducible site-specific delivery enables consistent cross-study comparison in lead identification campaigns.

What quantitative measurements enable longitudinal assessment of RCC progression?

Tumor volume via caliper imaging or bioluminescent signal intensity from luciferase-labeled RCC cells allows longitudinal tracking of primary tumor growth and metastatic burden. These quantitative outputs provide objective, scalable readouts for evaluating therapeutic effects over time. Consistent measurement intervals support statistical power in preclinical efficacy studies.

Why are replication requirements critical for cross-functional collaboration in RCC model development?

Reproducible tumor take and metastasis rates across animals and experiments ensure data reliability when shared between discovery, translational, and preclinical teams. Consistent model performance reduces variability in efficacy readouts, enabling confident go/no-go decisions based on shared datasets. Standardized surgical and cell preparation protocols are essential to maintain this reproducibility across sites.

What statistical analysis capabilities are required before implementing this model in therapeutic screening?

Implementation requires power analysis to determine group sizes capable of detecting meaningful differences in tumor growth or metastasis suppression. Longitudinal data necessitate mixed-effects models or repeated measures ANOVA to account for within-animal correlation over time. Predefined endpoints and statistical analysis plans are essential to minimize bias and ensure regulatory-aligned decision-making.

Gerando Modelo de Carcinoma de Células Renais: Um Protocolo para Desenvolver Modelo Murino de CCR Ortotópico por Implantação Intrarrenal de Células Cancerígenas

JoVE Encyclopedia of Experiments

Pesquisa sobre o Câncer

0 vistas • 3:49 min • April 30th, 2023

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A implantação de células de carcinoma de células renais, ou CCR, de um camundongo doador para o rim de um camundongo receptor imunocomprometido leva ao desenvolvimento de um modelo ortotópico de CCR.

Para desenvolver um modelo ortotópico de CCR, comece colocando um camundongo imunodeficiente anestesiado em decúbito ventral em uma placa de dissecação. Agora, use um bisturi para fazer um corte cirúrgico no flanco esquerdo do mouse, mantendo o peritônio subjacente intacto.

Palpe o mouse aplicando uma leve pressão na parte inferior. Esta etapa ajuda a visualizar o rim através do peritônio translúcido. Em seguida, pegue uma seringa contendo suspensão de células do CCR em um meio apropriado. Usando uma agulha, injete a suspensão celular no rim sem danificar o peritônio.

Retraia a agulha e sele o local da incisão usando um adesivo tecidual. Permita que o mouse se recupere e monitore o crescimento do tumor nos intervalos desejados. Inicialmente, as células cancerígenas renais injetadas são implantadas no rim. Essas células então proliferam para formar tumores.

Posteriormente, algumas células podem se desprender do tumor primário e se disseminar dentro da cavidade peritoneal. Essas células tumorais migratórias podem invadir o tecido pulmonar e metastatizar para formar tumores secundários.

Para preparar as células tumorais Renca, primeiro, anexe a cultura de células com 0,25% de tripsina em HBSS após enxágue com PBS. Neutralize a reação após 5 minutos com meio RPMI completo. Transfira as células para um tubo cônico para centrifugação e ressuspenda o pellet em HBSS fresco.

Após a contagem, ajuste o volume para uma concentração de 2 vezes 10 elevado à sexta células por mililitro em HBSS e coloque as células em uma seringa de 1 mililitro equipada com uma agulha de calibre 18. Em seguida, coloque uma cortina cirúrgica estéril sobre uma almofada de aquecimento e confirme o nível apropriado de sedação com a pinça do dedo do pé. Remova o cabelo do flanco esquerdo do mouse e aplique pomada veterinária nos olhos.

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Última atualização: 1 agosto 2026

Gerando Modelo de Carcinoma de Células Renais: Um Protocolo para Desenvolver Modelo Murino de CCR Ortotópico por Implantação Intrarrenal de Células Cancerígenas

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