Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Pesquisa sobre o Câncer
0 visualizações • 2:57 min. • April 30th, 2023
O peixe-zebra adulto contém um único rim achatado preso à parede dorsal do corpo por meio de tecidos conjuntivos. Consiste em três regiões principais: cabeça, tronco e cauda. A unidade funcional do rim, os néfrons, são altamente ramificados e drenam para dois dutos coletores principais.
Para isolar o rim, primeiro, prepare um peixe-zebra adulto sacrificado com o lado ventral voltado para cima. Faça uma incisão atrás do opérculo - uma aba óssea cobrindo as brânquias - para remover a cabeça. Posteriormente, faça outra incisão da cabeça até a base da nadadeira caudal ou caudal para expor e remover os órgãos internos.
Agora, abra as paredes do corpo para visualizar o rim. Disseque o tecido conjuntivo subjacente para separar o rim da parede dorsal. Transfira o órgão para um frasco contendo um tampão adequado, lavando-o bem para remover os detritos. O tampão ajuda a fornecer condições fisiológicas. Após a lavagem, coloque o rim, hidratado com tampão, em uma lâmina de vidro.
Certifique-se de que o rim esteja completamente achatado, fazendo cortes no tecido conjuntivo, se necessário. Esta etapa facilita a visualização durante a geração de imagens. Por fim, prenda a preparação do órgão usando uma lamínula afixada com peças de argila de modelagem em seus cantos. A argila ajuda a prevenir a deformação do tecido. O tecido de montagem plana está agora pronto para análise microscópica.
Para começar, decantar qualquer solução extra de um peixe anestesiado e coloque-a sobre um lenço de papel ou toalha de papel. Depois de remover a cabeça e os órgãos internos, use agulhas de dissecção superfinas para prender as paredes do corpo. Localize o órgão renal, que é aderente à parede dorsal do animal.
Use uma pinça fina para separar o rim da parede dorsal. Coloque delicadamente o rim em um frasco de vidro de 5 mililitros contendo 1x PBS e lave três vezes por 5 minutos cada. Remova o rim com uma pipeta de transferência e coloque-o em uma lâmina de vidro limpa com uma a duas gotas de 1x PBS.
Use uma pinça fina para achatar o rim na lâmina, certificando-se de que nenhum tecido tenha se enrolado ou virado sobre si mesmo. Uma ferramenta de fio de tungstênio pode ser usada para fazer pequenas incisões no tecido conjuntivo para facilitar o posicionamento plano do rim.
Em seguida, coloque pequenos pedaços de massa de modelar em cada canto de uma lamínula de vidro de 18 por 18 milímetros. Lentamente, coloque a lamínula no rim, mantendo um pequeno ângulo para minimizar a retenção de bolhas de ar. Adicione uma gota adicional de 1x PBS para preencher o espaço entre a lamínula e o slide, se necessário.