Inativação do gene alvo baseada no sistema CreER-LoxP: um sistema Cre Recombinase induzível por tamoxifeno para nocaute do gene alvo em um modelo de camundongo

Comece com um modelo de camundongo geneticamente modificado compreendendo um genoma modificado que abriga locais LoxP - sequências específicas reconhecidas por enzimas Cre-recombinase - flanqueando o gene de interesse. O camundongo é ainda transfectado com um vetor de plasmídeo que codifica a recombinase CreER específica do órgão, levando à integração do elemento que expressa a recombinase CreER no genoma das células do fígado.

A CreER recombinase expressa, uma proteína de fusão inativa envolvendo Cre recombinase e o domínio de ligação ao ligante mutante do receptor de estrogênio, ER, interage e se liga à proteína de choque térmico no citoplasma. Essa ligação confina a CreER recombinase no citoplasma.

Prepare uma solução de tamoxifeno, um medicamento hidrofóbico, usando etanol e óleo adequado. Agora, injete a solução de tamoxifeno por via intraperitoneal no quadrante inferior esquerdo do abdômen do camundongo para evitar danos aos órgãos abdominais.

O tamoxifeno injetado é metabolizado no fígado em 4-hidroxitamoxifeno, 4-OHT. Além disso, o 4-OHT, um modulador seletivo do receptor de estrogênio, liga-se ao domínio de ligação do ligante ER da CreER recombinase, causando sua mudança c