JoVE Encyclopedia of Experiments
Técnicas Biológicas
0 vistas • 2:15 min • July 8th, 2025
As nanolâminas são partículas sintéticas semelhantes a vírus sem o material genético viral encapsulado, tornando-as transportadoras adequadas para cargas estrangeiras nas células hospedeiras. Essas nanolâminas são construídas usando o núcleo retroviral do vírus da leucemia de camundongo cercado pela membrana de bicamada lipídica derivada das células produtoras eucarióticas usadas para montar nanolâminas in vitro.
O núcleo contém a enzima Cas9 complexada com o sgRNA específico para a sequência do genoma alvo. As proteínas centrais são cercadas pelas proteínas do envelope que contêm um domínio transmembrana ou TM que passa pela bicamada lipídica. A MT se liga a um domínio de superfície glicoproteinácea extracelular ou SU que se projeta do revestimento de bicamada.
Para usar nanoblades para edição de genes, pegue uma cultura de células-alvo aderentes e complemente-a com a solução de nanoblade. Na cultura, o SU saliente de uma nanolâmina reconhece o receptor correspondente na superfície da célula hospedeira e se liga a ele. Isso leva a modificações na estrutura do domínio SU, facilitando sua liberação.
Essas mudanças desencadeiam as mudanças conformacionais no domínio TM, que então se liga à membrana do hospedeiro. Essa ligação aproxima a nanolâmina da célula hospedeira, permitindo a fusão da membrana da bicamada viral com a membrana do hospedeiro, e o núcleo viral se move para o citoplasma.
Uma vez dentro da célula, o núcleo se desintegra, liberando o complexo Cas9-sgRNA que pode realizar a edição do genoma em seu local de destino.
Para transdução de células-alvo com nanolâminas, substitua o meio de cultura celular por 500 microlitros do meio contendo nanolâminas purificadas. Após quatro a seis horas de incubação celular, substitua o meio pela quantidade normal de meio fresco.