Nucleofecção de formas de parasitas: um método de transfecção baseado em eletroporação para entregar plasmídeos codificadores de proteínas fluorescentes no núcleo do esporozoíto

Para entregar plasmídeos em núcleos de esporozoítos por nucleofecção, comece com uma suspensão de esporozoítos isolados e viáveis - estágio móvel e infeccioso de parasitas - em tampão. Os esporozoítos são células delgadas envolvidas por uma membrana plasmática externa e um complexo de membrana interna subjacente que consiste em uma série de vesículas achatadas e proteínas críticas para a estabilidade estrutural e motilidade.

Centrifugue a suspensão para peletizar os esporozoítos. Ressuspenda o pellet de esporozoíto em um volume adequado de tampão de transfecção nuclear, suplementado com plasmídeos codificadores de proteínas fluorescentes. O tampão de transfecção nuclear com alta capacidade tamponante e força iônica garante uma transfecção eficiente, preservando a funcionalidade do esporozoíto.

Transferir a suspensão para uma cubeta de transfecção nuclear. Coloque a cubeta no suporte de um dispositivo de nucleofecção. Execute o programa de nucleofecção apropriado.

Durante a nucleofecção, especificamente aplicada, pulsos curtos e de alta voltagem, juntamente com constituintes tampão, interrompem temporariamente a membrana plasmática e o complexo da membrana interna, formando poros tr