Injeção de perivitelina baseada em vetor lentiviral: um método para transduzir o gene de interesse em oócitos de camundongo unicelular fertilizados
Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Técnicas Biológicas
0 visualizações • 4:16 min. • July 8th, 2025
Para realizar a transfecção, pegue uma câmara especializada contendo óvulos de camundongo recém-fertilizados suspensos em uma gota de meio apropriado. Nesta fase, o óvulo contém um grande oócito central contendo os pronúcleos paterno e materno.
O oócito é coberto por uma zona pelúcida rica em glicoproteínas, cercada por aglomerados de células do cumulus bem dispostas embutidas na matriz extracelular rica em ácido hialurônico. Agora, trate os ovos com a enzima hialuronidase, que digere o ácido hialurônico. Isso dissocia as células do cumulus, eventualmente expondo a zona pelúcida ao redor do oócito.
Posicione um único oócito tratado perto da ponta de uma pipeta de retenção e aplique pressão de sucção para restringir sua posição. Pegue uma agulha de microinjeção de calibre estreito contendo uma suspensão de vetor lentiviral projetada carregando um transgene encapsulado dentro do envelope viral. Esses retrovírus têm a capacidade inerente de se integrar ao genoma do hospedeiro.
Em seguida, perfure a agulha através da zona pelúcida para alcançar o espaço perivitelino - um espaço entre a zona pelúcida mais externa e a membrana plasmática mais interna. Introduzir a suspensão do vetor lent
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