Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Técnicas Biológicas
0 visualizações • 3:31 min. • July 8th, 2025
A entrega de genes lentivirais assistida por laser é uma técnica para transferir um transgene para um sistema hospedeiro.
Para produzir camundongos transgênicos, comece com ovos fertilizados de camundongos isolados em um meio de cultura adequado. Coloque a placa de cultura contendo óvulo fertilizado em um microscópio pré-instalado com um aparelho de laser e conectado a um software de controle. Observe com ampliação adequada.
Os ovos fertilizados são cercados por zona pelúcida, uma camada protetora de glicoproteína que bloqueia as partículas lentivirais. Para permear essa barreira, ligue o aparelho de laser e certifique-se de que o LED do laser esteja visível sobre a zona pelúcida. Usando o software de controle, dispare o laser. Ajuste a duração do disparo de acordo com o diâmetro de perfuração desejado.
Coloque os ovos em uma incubadora para recuperação. Após uma breve incubação, remova os ovos e adicione partículas de lentivírus carregando o gene de interesse e um marcador selecionável fluorescente.
Com a zona pelúcida perfurada, o lentivírus se difunde facilmente em direção à membrana do óvulo e entra por endocitose. O lentivírus se desmonta, liberando seu RNA, que, quando proces
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