Transferência de genes mediada por biolística: uma técnica para entregar genes de interesse em células-alvo por meio de uma arma de genes biolísticos

Comece com um volume ideal de esferas de ouro - veículos de entrega de genes biologicamente inertes e não tóxicos - em um tubo de microcentrífuga. Em seguida, adicione agentes catiônicos - espermidina e cloreto de cálcio, seguidos pelos fragmentos de DNA desejados às contas de ouro. Agite suavemente o tubo e incuba.

O cloreto de cálcio se liga aos fragmentos de DNA e facilita seu revestimento sobre as contas de ouro por meio de resíduos de espermidina. Em seguida, centrifugue e remova o solvente. Ressuspenda as esferas revestidas de DNA em etanol. Pipetar suavemente os grânulos num disco macrotransportador estéril. Deixe secar.

Configure um aparelho de arma de genes biolísticos compreendendo um tubo de aceleração de gás hélio e uma câmara de bombardeio com um disco de ruptura e uma tela de parada em seus respectivos slots. Em seguida, inverta o disco macroportador e carregue-o abaixo do disco de ruptura.

Em seguida, coloque as células-alvo hospedeiras cultivadas em um meio sólido adequado suplementado com sorbitol - um estabilizador osmótico para melhorar a eficiência da transformação. Quando a configuração estiver pronta, dispare a arma genética.

À medida que o hélio desce pelo tu