Transfecção baseada em magnetofecção in vitro: uma técnica assistida por campo magnético para entregar plasmídeos em células neuronais primárias de camundongos usando nanopartículas magnéticas
Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Técnicas Biológicas
0 visualizações • 3:43 min. • July 8th, 2025
Comece com DNA plasmidial codificador de proteína fluorescente ou suspensão de pDNA em meio. Adicione nanopartículas magnéticas biocompatíveis e revestidas com polímero catiônico à suspensão de pDNA e incuba.
Os polímeros catiônicos carregados positivamente interagem eletrostaticamente e se conjugam com o pDNA carregado negativamente, resultando na condensação do pDNA e na formação de 'poliplexos magnéticos' com uma carga positiva geral.
Agora, transfira a mistura de poliplexo para uma placa de vários poços contendo cultura de células neuronais primárias de camundongo aderente. Monte a placa de vários poços sobre uma placa magnética e incuba.
O campo magnético gerado pela placa magnética faz com que os poliplexos sedimentem e se acumulem sobre a superfície da célula neuronal. Esse contato próximo com a superfície celular facilita a ligação não específica de poliplexos carregados positivamente a proteoglicanos associados à membrana celular carregada negativamente.
Posteriormente, os poliplexos são internalizados por endocitose - um processo em que as regiões locais da membrana celular invaginam e se comprimem para formar vesículas ligadas à membrana chamadas endossomos.
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