Transdução gênica mediada por retrovírus: uma técnica de transferência de genes para entregar um transgene em células cultivadas usando vetores retrovirais projetados

Para transduzir células hospedeiras com RNA contendo vetores retrovirais, pegue um tubo contendo vetores empacotados em meios adequados. Cada vetor contém um capsídeo viral, contendo o complemento de RNA do transgene a ser integrado ao genoma do hospedeiro e enzimas virais importantes. Uma bicamada lipídica envolve o capsídeo para facilitar a entrada na célula hospedeira.

Adicionar os vectores na presença de um reagente de transfecção adequado ao poço de uma placa de cultura contendo a suspensão da célula hospedeira. Cubra o prato. Centrifugue em baixa velocidade para permitir a transdução de spin. Isso aproxima o vetor viral da superfície da célula hospedeira, aumentando a eficiência da transdução.

Simultaneamente, os policátions no reagente de transfecção neutralizam cargas negativas no vírus e na célula hospedeira, promovendo a adsorção viral nas células-alvo.

Consequentemente, os receptores na superfície do vírus facilitam sua fusão com a membrana do hospedeiro. O capsídeo viral entra na célula e se rompe, liberando RNA transgênico e enzimas virais em seu citoplasma.

Dentro do citoplasma, a transcriptase reversa viral converte o RNA em um DNA complementar de fita simples, poste