Purificação de proteínas baseada em cromatografia de troca aniônica: uma técnica de separação para isolar uma proteína de interesse do lisado bacteriano dialisado com base na carga líquida

Para a separação por cromatografia de troca aniônica de uma proteína de interesse de um lisado de proteína bacteriana dialisada, adicione um tampão de ligação para reduzir a viscosidade do lisado e evitar que ele obstrua a coluna cromatográfica.

Os agentes quelantes no tampão se ligam a cátions divalentes, inibindo a atividade da protease e impedindo a degradação da proteína. Além disso, o tampão com pH acima do ponto isoelétrico da proteína-alvo, pI, o pH no qual a proteína não tem carga líquida, faz com que o excesso de íons hidroxila carregados negativamente neutralize os grupos amina carregados positivamente da proteína, tornando a superfície da proteína carregada negativamente.

Montar a coluna de cromatografia de permuta aniónica contendo a fase estacionária reticulada à base de agarose com grupos aminas quaternárias carregadas positivamente. Adicione o tampão de ligação para preparar a coluna para interação máxima de proteínas durante o carregamento da amostra. Carregue o lisado bacteriano diluído.

As proteínas-alvo carregadas negativamente ligam-se mais fortemente aos grupos carregados positivamente na coluna do que as proteínas menos carregadas negativamente.

Execute o tamp