Cromatografia de interação hidrofóbica dependente de cálcio: uma técnica para purificar proteínas de ligação ao cálcio com base em interações hidrofóbicas

A cromatografia de interação hidrofóbica dependente de cálcio é uma técnica para separar proteínas de ligação ao cálcio de outras proteínas não ligantes de cálcio em uma amostra.

Para começar, pegue uma coluna de cromatografia pré-montada contendo uma matriz de grânulos de agarose reticulados derivatizados com grupos fenil hidrofóbicos para facilitar as interações com as proteínas-alvo. Equilibre-o com um tampão de ligação contendo uma concentração muito alta de íons de cálcio para interação máxima de resina e proteína-alvo durante o carregamento subsequente da amostra.

Pegue uma amostra contendo a mistura de proteínas dialisada e complemente-a com uma concentração igual de cloreto de cálcio usada no tampão de ligação para equilíbrio da coluna. Isso maximiza a ligação de proteínas à coluna.

Os íons de cálcio se ligam a proteínas específicas no lisado, induzindo uma mudança conformacional nessas moléculas de proteína, expondo suas regiões hidrofóbicas.

Filtre a mistura para separar impurezas e agregados para evitar que entupam a coluna. Carregar este filtrado na coluna pré-equilibrada. Proteínas com regiões hidrofóbicas expostas interagem com os grupos fenil hidrofóbicos corresponde