Purificação de Baculovírus Baseada em Cromatografia de Afinidade de Heparina: Uma Técnica para Isolar Baculovírus do Sobrenadante de Células de Insetos

Os baculovírus - vírus de DNA de fita dupla - são cercados por um envelope contendo as principais glicoproteínas virais, como o GP64.

Para isolar os baculovírus de um sobrenadante de cultura de células contendo detritos celulares e proteínas contaminantes, montar uma coluna de cromatografia de afinidade de heparina contendo uma matriz de grânulos de agarose reticulados. Essas esferas são acopladas à heparina, um polissacarídeo linear com grupos sulfato, que conferem uma carga negativa à cadeia da heparina.

Equilibre a coluna com um tampão de lavagem com pH neutro e força iônica ideal para fornecer condições favoráveis para interações máximas de baculovírus e heparina durante o carregamento do sobrenadante. Carregue o sobrenadante contendo baculovírus na coluna.

Os aminoácidos básicos do baculovírus GP64 facilitam interações eletrostáticas inespecíficas com a heparina carregada negativamente e se ligam firmemente à coluna, ao contrário dos contaminantes que se ligam frouxamente. Enxágue a coluna com um tampão de lavagem, removendo proteínas e detritos contaminantes não ligados e frouxamente ligados.

Passe um tampão de eluição com maior força iônica do que o tampão de lavagem pela co