Cromatografia de troca catiônica: uma técnica para isolar a proteína recombinante alvo do lisado de células de insetos com base na carga superficial líquida

A cromatografia de troca catiônica facilita a separação de proteínas das misturas com base em sua carga superficial líquida.

Para o isolamento da proteína do transdutor de sinal alvo do lisado de proteína de célula de inseto, obtenha um lisado de proteína alvo dialisado contendo outras proteínas contaminantes. Adicione tampão contendo cloreto de sódio para reduzir a viscosidade do lisado e melhorar a solubilidade da proteína, o que ajuda a evitar o entupimento da coluna cromatográfica durante a execução.

Além disso, o pH do tampão abaixo do ponto isoelétrico da proteína-alvo, pI, no qual a proteína tem carga líquida zero, facilita a ligação do excesso de íons de hidrogênio a grupos carboxilato negativos, tornando a proteína-alvo carregada positivamente.

Montar a coluna cromatográfica contendo grânulos de agarose reticulados acoplados a grupos carregados negativamente. Adicione um tampão de ligação para equilibrar a coluna e maximizar as interações coluna-proteína. Carregar o lisado diluído na coluna equilibrada.

Proteínas-alvo mais carregadas positivamente interagem e se ligam fortemente aos grupos carregados negativamente da coluna do que proteínas contaminantes menos carregadas p