Cromatografia Líquida de Interação Hidrofílica: Uma Técnica para Separar Analitos Polares Hidrofílicos Usando Grânulos Hidrofílicos

A cromatografia líquida de interação hidrofílica, HILIC, é uma técnica para separar compostos polares hidrofílicos com base em seu grau de polaridade. Comece montando uma coluna HILIC repleta de esferas hidrofílicas carregando grupos funcionais polares.

Primeiro, condicione a coluna usando um tampão de equilíbrio e uma fase móvel - uma mistura de solvente orgânico e água. As moléculas tampão estabilizam o pH, enquanto o solvente orgânico satura a coluna. As moléculas de água imobilizam e criam uma camada aquosa sobre as esferas hidrofílicas.

Carregue a amostra contendo uma mistura de glicanos - compostos polares hidrofílicos - marcados com uma etiqueta fluorescente. Execute a amostra usando um gradiente de fase móvel através da coluna a uma taxa de fluxo ideal.

À medida que a amostra se move ao longo da fase móvel hidrofóbica, os glicanos migram para a camada aquosa, deixando para trás as impurezas. Posteriormente, os glicanos se movem em direção aos grupos funcionais polares nas contas. Aqui, os glicanos mais polares se ligam fortemente, enquanto os menos polares se ligam frouxamente.

À medida que a hidrofobicidade da fase móvel diminui, glicanos fracamente ligados com menos polar