Separação baseada em cromatografia de exclusão de tamanho de vesículas extracelulares bacterianas: uma técnica para separar a população heterogênea de vesículas bacterianas da membrana externa gram-negativas com base em seu tamanho

Sob condições de cultura adequadas, as bactérias gram-negativas liberam vesículas de membrana externa que transportam carga, ou OMVs, no sobrenadante. Essas vesículas são estruturas esféricas, pequenas e de tamanho heterogêneo, que medeiam a comunicação celular.

Para fracionar subpopulações de OMVs de tamanhos diferentes, pegue uma coluna de cromatografia de exclusão de tamanho vazia com um filtro apropriado em sua base para apoiar a matriz.

Embale a coluna com matriz de filtragem de gel consistindo em grânulos esféricos quimicamente inertes de tamanho de poro definido, garantindo que o tamanho seja ideal para excluir a entrada de OMVs de grande porte. Equilibre a coluna com um tampão apropriado para evitar que as esferas sequem para uma purificação ideal.

Carregue o sobrenadante de cultura bacteriana contendo subpopulações de OMVs, agregados de proteínas e ácidos nucléicos de tamanhos diferentes no topo da coluna. Permita que as amostras sejam executadas pela força da gravidade.

À medida que as amostras passam pela coluna, OMVs maiores que não podem entrar nos poros se movem pelos espaços interpartículas entre os grânulos de gel para serem eluídos primeiro. Enquanto isso, os OMVs