Cromatografia líquida de interação hidrofóbica dependente de butil: uma técnica para caracterizar conjugados anticorpo-droga com base em interações hidrofóbicas

Os conjugados anticorpo-droga - ADCs - são formados pela ligação de um anticorpo monoclonal alvo-específico com drogas citotóxicas por meio de ligantes adequados. O processo de conjugação estocástica cria ADCs com diferentes números de porções de drogas.

As espécies de ADC são caracterizadas por sua relação medicamento-anticorpo ou DAR, que determina sua eficácia terapêutica. A hidrofobicidade dos ADCs os torna candidatos adequados para cromatografia líquida de interação hidrofóbica ou caracterização baseada em HIC.

Para começar, monte uma coluna de cromatografia contendo uma fase estacionária baseada em matriz de agarose. A matriz é reticulada com porções butílicas - os grupos funcionais alquil hidrofóbicos. Equilibre a coluna com um tampão de ligação de sal alto. Em seguida, coloque a solução ADC na coluna.

Os íons de sal no tampão deslocam as moléculas de água ao redor dos ADCs, expondo suas regiões hidrofóbicas. Isso permite que os ADCs se liguem aos ligantes butílicos por meio de interações hidrofóbicas. ADCs com um maior número de porções de drogas ligadas mostram uma interação mais forte com a coluna.

Substitua lentamente o tampão de alta salinização pelo tampão de eluição c