Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Técnicas Biológicas
0 visualizações • 3:05 min. • July 8th, 2025
As proteínas integrais da membrana bacteriana, ancoradas nas membranas da bicamada lipídica, facilitam o transporte de moléculas através das membranas e a transdução de sinais. Para estudos estruturais, proteínas recombinantes de membrana integral específicas são superexpressas com proteína fluorescente verde fundida, GFP.
Para avaliar a estabilidade da proteína de membrana recombinante após a solubilização do detergente, obtenha a fração de membrana bacteriana contendo proteínas integrais de membrana marcadas com GFP. Adicione um detergente não iônico. Além da concentração crítica, o detergente forma micelas.
As micelas interagem com membranas lipídicas e proteínas de membrana, solubilizando as membranas e formando complexos proteína-detergente. Além disso, as regiões transmembranares hidrofóbicas das proteínas de membrana podem permanecer desmascaradas, causando agregação de proteínas. Além disso, GFPs livres podem resultar devido à degradação de proteínas de membrana.
Centrifugue a mistura. Recolher o sobrenadante que contém fracção solubilizada por detergente.
Monte uma coluna de cromatografia de exclusão de tamanho conectada a um detector de fluorescência. A matriz da coluna c
Veja a transcrição completa e aceda a milhares de vídeos científicos