Cromatografia de afinidade baseada em DFE: uma técnica para purificação de anticorpos monoclonais 2F5 de uma amostra bruta usando condições de eluição baseadas em alta força iônica

O DFE ou DsRed-2F5-Epitope é uma proteína de fusão recombinante que compreende DsRed, uma proteína fluorescente, e o epítopo 2F5 - um segmento do antígeno glicoproteico do envelope do HIV-1. Este epítopo tem uma alta afinidade por seu parátopo - uma região na região determinante da complementaridade no anticorpo monoclonal 2F5.

Para purificar os anticorpos monoclonais 2F5 de uma amostra bruta, pegue uma coluna cheia de esferas de resina porosa contendo ligantes de afinidade DFE imobilizados em sua superfície. Lavar a coluna com um tampão de equilíbrio adequado para manter o pH e evitar interacções inespecíficas entre os componentes da amostra e a resina nas etapas subsequentes.

Colocar a amostra que contém os anticorpos monoclonais 2F5 alvo na coluna. Gradualmente, os anticorpos na amostra começam a fluir através da coluna ou da fase estacionária.

Durante o fluxo, os anticorpos interagem reversivelmente com os ligantes de afinidade DFE imobilizados na fase estacionária. Nessas interações, o parátopo no anticorpo 2F5 se liga especificamente ao seu epítopo complementar no ligante DFE.

Lave a coluna com um tampão de equilíbrio para remover amostras indesejáveis ligadas de forma não es