Eletroforese em gel de agarose semi-desnaturante bidimensional: uma técnica para separar fibras amilóides polimórficas com base na heterogeneidade de tamanho

As fibras amilóides são agregados de proteínas mal dobradas, que exibem heterogeneidade de tamanho. Essas fibras, sendo resistentes a detergentes aniônicos como o SDS, podem ser analisadas por meio de eletroforese bidimensional em gel de agarose semidesnaturante.

Para começar, pegue um gel de agarose pré-montado e do tamanho de um poro grande que contenha SDS. A alta porosidade permite a separação de fibras intactas durante a corrida. Cubra o gel com um tampão de corrida contendo SDS.

Carregue um lisado celular contendo fibras amilóides no gel. A presença de SDS e a ausência da etapa de aquecimento da amostra criam condições semi-desnaturantes onde o detergente se liga a amilóides altamente resistentes, conferindo uma carga negativa uniforme às fibras intactas.

Execute o gel na primeira dimensão na tensão apropriada. O campo elétrico causa a migração de amilóides carregados negativamente em direção ao ânodo carregado positivamente.

Durante a corrida, as fibras menores migram rapidamente em comparação com as maiores - formando um padrão de banda semelhante a um esfregaço, indicando heterogeneidade de tamanho.

Após a conclusão, gire o gel perpendicularmente e passe-o na segunda dimen