Eletroforese em gel de agarose de amplicons de DNA pós-PCR: um método para analisar produtos de PCR multiplex e avaliar o sucesso da reação de PCR

Para analisar os amplicons de DNA - fragmentos de DNA amplificados de comprimento específico - resultantes da reação em cadeia da polimerase multiplex, PCR, usando eletroforese em gel de agarose, montar uma bandeja de fundição com um pente para criar poços para carregamento de amostras.

Despeje uma concentração adequada de agarose fundida, um polissacarídeo linear, dissolvido em tampão de eletroforese, complementado com um corante de DNA fluorescente, na bandeja de fundição e deixe solidificar.

A agarose derretida polimeriza, formando um gel tridimensional com poros microscópicos.

Coloque o gel fundido em um tanque de eletroforese, com o lado do pente orientado próximo ao cátodo negativo. O tanque contém o tampão de eletroforese usado na preparação do gel para manter a condutividade ideal. Retire o pente.

Transfira a amostra do produto de PCR, misturada com a solução de corante de carregamento para monitorar a migração da amostra, para os poços. Carregue um poço com escadas de DNA de comprimento definido. Inicie a eletroforese.

Os amplicons de DNA, com grupos fosfato negativos uniformemente espaçados, migram dos poços para o gel em direção ao ânodo positivo e se separam com base em