SDS Page não redutor: um método para analisar complexos de proteínas multiméricas ligadas a dissulfeto

As proteínas multiméricas são estabilizadas por ligações intermoleculares, covalentes e dissulfeto entre seus resíduos de cisteína, o que é crucial para manter sua integridade estrutural e funcional.

Para analisar esses complexos por PAGE não redutor, pegue a concentração desejada de proteínas estabilizadas com dissulfeto. Adicione um tampão de amostra não redutor e aqueça a amostra.

Este tampão contém SDS, que confere uma carga negativa geral às proteínas, e um corante de rastreamento para visualizar seu movimento no gel. O tampão não possui nenhum agente redutor, o que permite que as ligações dissulfeto permaneçam intactas, facilitando que o complexo multimérico permaneça intacto.

Carregue os complexos individuais em poços do gel de poliacrilamida da porcentagem desejada, pré-montado em um aparelho de gel. Adicione uma escada de proteína de tamanho conhecido em outro poço. Mergulhe os poços em um buffer de execução baseado em SDS e conecte o aparelho a uma fonte de alimentação.

A corrente elétrica força os complexos de proteínas carregados negativamente a se moverem através dos poros do gel em direção ao ânodo - o terminal positivo. Como os complexos de proteínas são uniformement