Focalização isoelétrica em fase líquida: uma técnica de eletroforese para separar moléculas bioativas do extrato bruto de Gymnema sylvestre

Comece com uma focalização isoelétrica pré-montada, célula IEF - uma unidade de eletroforese em fase líquida. Esta coluna é uma câmara porosa horizontal compartimentada com terminais positivos e negativos distintos nas extremidades.

Agora, pegue o extrato da planta contendo uma mistura complexa de componentes de carga diferente com pontos isoelétricos variados, pI - um pH em que a carga líquida em uma molécula é zero.

O extrato é complementado com anfólitos de cargas variáveis que facilitam o fracionamento posterior dos componentes da amostra.

Carregue a amostra nas portas de carregamento da coluna. Atualmente, a coluna IEF tem um pH constante. Em seguida, aplique alta tensão para iniciar a eletroforese.

Sob o campo elétrico, os anfólitos solúveis migram em direção a eletrodos de carga oposta e estabelecem um gradiente linear de pH ao longo da coluna. Os componentes da amostra começam a migrar através do gradiente de pH da fase líquida, e aqueles posicionados em pH abaixo de seu pI carregam uma carga líquida positiva.

Estes migram em direção ao eletrodo negativo até que os componentes atinjam seu pI, onde sua carga se neutraliza e a migração para. Da mesma forma, os componentes em