Eletroforese em gel de poliacrilamida bidimensional: uma técnica de separação para análise de proteínas em mistura de proteínas complexas com base na carga e no peso molecular

Para eletroforese em gel bidimensional de mistura de proteínas derivada de tecido tumoral homogeneizado, trate com tampão contendo caotrópicos, detergente zwitteriônico e agente redutor. Caotrópios e detergentes desnaturam e solubilizam as proteínas. Os agentes redutores reduzem as ligações dissulfeto das proteínas, gerando grupos tióis livres e desdobrando as proteínas para uma resolução ideal da proteína.

Transfira a mistura de proteínas tratada para um gradiente de pH imobilizado, IPG, porta-tiras. Coloque uma tira IPG compreendendo gradiente de pH linear dentro da matriz de gel de acrilamida. Adicione óleo mineral para evitar a evaporação da solução proteica. Transfira o suporte para um sistema IEF de foco isoelétrico. Deixe a solução de proteína reidratar a tira.

Execute o IEF de primeira dimensão. A corrente elétrica faz com que as proteínas carregadas migrem através do gradiente de pH em direção aos eletrodos de carga oposta, imobilizando-se em seus respectivos pontos isoelétricos - pH no qual as proteínas têm carga líquida zero.

Pós-IEF, trate a tira de IPG com dodecil sulfato de sódio, SDS, um detergente aniônico que confere carga negativa às proteínas. Equilibre com um ag