Eletroforese em gel com zimografia: uma técnica eletroforética para detectar metaloproteinases da matriz avaliando a atividade enzimática

A metaloproteinase da matriz, ou MMP, uma protease de múltiplos domínios que compreende domínios propeptídicos e catalíticos, é secretada como uma enzima inativa ou zimogênica por células específicas. A interação entre o domínio catalítico íon zinco e o resíduo de cisteína do domínio propeptídico mantém a MMP inativa.

Para detectar MMPs no sobrenadante de cultura de células por eletroforese em gel de zimografia, encha o tanque de eletroforese contendo de gel com dodecil sulfato de sódio ou tampão de corrida contendo SDS.

Carregue o sobrenadante de cultura misturado com tampão de carga, seguido de padrões de proteína, em poços de gel de poliacrilamida, copolimerizado com um substrato proteico específico para MMP.

O SDS, um detergente carregado negativamente, em condições não redutoras, interrompe as interações cisteína-zinco em MMPs e desnatura as proteínas enquanto transmite uma carga negativa.

Realize eletroforese. O campo elétrico faz com que as proteínas carregadas negativamente migrem em direção ao ânodo carregado positivamente, causando a separação de proteínas com base no tamanho.

Após a eletroforese, trate o gel com um tampão de renaturação contendo detergente não iônico. Os