Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Técnicas Biológicas
0 visualizações • 3:16 min. • July 8th, 2025
Os fosfolipídios são lipídios complexos contendo grupos fosfato. Essas moléculas são hidrolisadas por uma enzima chamada fosfolipase.
Para realizar o ensaio de atividade da fosfolipase, pegue uma emulsão de gema de ovo rica em fosfolipídios, que atuam como substrato para a enzima. Adicione a gema a uma solução quente de agarose contendo cloreto de sódio, o que aumenta a estabilidade das proteínas da gema durante as etapas subsequentes.
Complemente a mistura com cloreto de cálcio e um corante fluorescente - rodamina. Despeje a mistura em uma placa de Petri. Após a solidificação, os fosfolipídios da gema permanecem homogeneamente distribuídos na matriz do gel de agarose.
Usando um tubo, crie poços adequadamente distanciados no gel. Adicione concentrações variadas de extrato de proteína bruta contendo fosfolipase aos poços. Incubar a placa à temperatura fisiológica.
A fosfolipase do extrato se difunde radialmente no gel. Os íons de cálcio no gel se ligam à fosfolipase, ativando as enzimas. Esta enzima cliva os fosfolipídios, gerando ácidos graxos livres. As moléculas de rodamina no gel formam um complexo com os ácidos graxos liberados.
Após a iluminação com luz ultravioleta, observe o
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