Ensaio de quiralidade celular de micropadronização em forma de anel: uma técnica in vitro para determinar a quiralidade multicelular com base no alinhamento celular em micropadrões em forma de anel

Para determinar in vitro a quiralidade das células de mamíferos - o viés esquerda-direita das células para se alinhar em uma orientação para a esquerda ou para a direita sob condições confinantes - comece com lâminas revestidas de ouro fabricadas sob medida em uma placa de vários poços contendo meio. As lâminas compreendem micropadrões de ilhas em forma de anel de fibronectina promotora de adesão celular, preenchidas com monocamada automontada resistente à adesão celular.

Em seguida, semeie um volume apropriado de suspensão de células de mamíferos nas lâminas e incuba. As células adsorvem nos micropadrões do anel contendo fibronectina. A monocamada auto-montada circundante evita a fixação de células não específicas fora dos limites do anel.

Substitua a mídia, removendo todas as células soltas, por uma nova mídia. Adicione um medicamento interferente na actina a um conjunto de lâminas e incuba.

As células aderidas proliferam, espalhando-se e assumindo a forma das ilhas de fibronectina subjacentes, enquanto reorganizam suas fibras de actina em resposta aos sinais espaciais, que confinam a monocamada celular, promovendo alinhamento tendencioso.

Agora, trate as lâminas com paraformalde