Ensaio de captação de vesículas extracelulares: um método para visualizar e quantificar a captação celular de vesículas extracelulares usando a técnica de imagem de fluorescência 3D

Para facilitar a comunicação celular, as células secretam vesículas extracelulares, EVs - estruturas de tamanho nanométrico envoltas por uma membrana lipídica. Os EVs carregam várias cargas biológicas, incluindo macromoléculas e metabólitos, para entregá-los às células receptoras.

Para visualizar a captação de EV pelas células usando microscopia confocal, primeiro pegue EVs recém-isolados. Esses EVs são pré-marcados com anticorpos ligados a uma sonda fluorescente para fácil visualização subsequente.

Adicione um volume adequado de EVs marcados com fluorescência a uma cultura de células receptoras aderentes. Incubar pelo período desejado. Durante a incubação, uma subpopulação de EVs marcados se liga superficialmente à superfície da célula, enquanto outros EVs são internalizados.

Adicione um corante fluorescente diferente para marcar o citoplasma da célula, ajudando a distinguir EVs internalizados daqueles aderidos à célula receptora. Coloque as células sob um microscópio confocal e imagens em diferentes planos focais ao longo do eixo z, adquirindo uma série de seções ópticas em toda a espessura da amostra.

Compile esta coleção de seções ópticas - uma pilha z - para formar uma imagem