Ensaio de reabsorção: uma técnica in vitro para quantificar a atividade de reabsorção de cálcio de osteoclastos maduros usando placas de cultura revestidas com fosfato de cálcio

Os osteoclastos, macrófagos multinucleados, facilitam a reabsorção óssea - quebra do tecido ósseo e a liberação de minerais ósseos.

Para quantificar a reabsorção de osteoclastos in vitro, cultivar células mononucleares do sangue periférico humano no fator estimulador de colônias de macrófagos, M-CSF, contendo meios para diferenciação em células progenitoras de osteoclastos e fixação. Colha os progenitores dos osteoclastos e centrifugue.

Pipetar a suspensão celular ressuspensa em meio, suplementada com M-CSF e ativador do receptor do ligante do fator nuclear kappa-Β, RANKL, em poços de placa de vários poços revestidos com fosfato de cálcio, imitando o componente ósseo inorgânico. O M-CSF e o RANKL causam diferenciação e fusão do progenitor dos osteoclastos em osteoclastos, ativando a reabsorção.

Os osteoclastos ativados se ligam ao revestimento de fosfato de cálcio, reorganizando seu citoesqueleto para formar uma zona de vedação rica em actina e desenvolvem bordas eriçadas, que secretam prótons e hidrolases ácidas. O ambiente ácido resultante dissolve o revestimento de fosfato de cálcio, liberando íons de cálcio e fosfato e formando um poço de reabsorção.

Pós-incubação, lavar os poç