Ensaio de oxidação de substrato em células cultivadas: um ensaio in vitro para quantificar a oxidação de substrato em células medindo sinais radioativos de CO₂ aprisionado

Em células metabolicamente ativas, os substratos contendo carbono são oxidados por meio de uma série de reações bioquímicas para gerar energia e liberar dióxido de carbono como subproduto.

Para determinar a taxa de oxidação do substrato, comece com uma cultura aderente das células indiferenciadas desejadas. Suplementar as células num meio com um substrato adequado contendo carbono radioactivo catorze na sua estrutura e incubar.

As células consomem o substrato e o oxidam para liberar dióxido de carbono radiomarcado, que se difunde das células para o meio circundante.

Transfira este meio para um conjunto de retenção de gás contendo ácido perclórico para extinguir a reação. Este tubo contém um papel de filtro embebido em hidróxido de sódio instalado dentro da tampa do tubo. Feche a tampa e incuba.

Durante a incubação, o dióxido de carbono, em sua forma gasosa, é liberado dentro do tubo. O hidróxido de sódio absorve o dióxido de carbono radiomarcado, prendendo-o no papel de filtro. Transfira este papel de filtro para um frasco contendo um coquetel de cintilação e posicione-o dentro do balcão de cintilação líquida.

Dentro do balcão, o carbono radiomarcado sofre decaimento radioativo, em