Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Técnicas Biológicas
0 visualizações • 3:57 min. • July 8th, 2025
Durante a regeneração óssea, os osteoblastos - células formadoras de osso - são recrutados para o local fraturado, onde proliferam e secretam osteóide - uma matriz colágena. Após um período de maturação, os osteoblastos mineralizam o osteóide por deposição regulada de íons cálcio e fosfato, iniciando a nova síntese óssea.
Para quantificar o grau de mineralização dos osteoblastos in vitro, obter a suspensão primária de osteoblastos em meios adequados. Semeie a suspensão em uma placa de vários poços contendo discos substitutos de enxerto ósseo poroso e incuba.
Os discos servem como um andaime, permitindo a adesão e proliferação celular.
Substitua os meios gastos por meios novos contendo suplementos osteogênicos. Incubar por um período prolongado. Os suplementos osteogênicos estimulam os osteoblastos a produzir e posteriormente mineralizar a matriz colágena.
Após a fixação, corar a matriz mineralizada com solução de vermelho de alizarina S, ARS. ARS, um corante carregado negativamente, liga-se a íons de cálcio carregados positivamente na matriz, formando um complexo de cor vermelha. Remova o excesso de manchas. Imagem da placa para detectar depósitos de cálcio vermelho, sugestivos de
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