Ensaio de germinação de grânulos para avaliação da angiogênese em estágio inicial: um modelo in vitro baseado em grânulos para estudar o brotamento endotelial na presença de pericitos

A angiogênese é a formação de novos vasos sanguíneos a partir dos vasos sanguíneos existentes durante condições patológicas e de desenvolvimento. A comunicação extensa entre as células endoteliais que revestem a superfície interna dos vasos sanguíneos e os pericitos circundantes - células de suporte no lado externo dos vasos sanguíneos - é crucial para a angiogênese.

Para estudar a angiogênese in vitro, comece com células endoteliais e esferas microcarreadoras revestidas com pericitos suspensas em uma solução de fibrinogênio - uma glicoproteína solúvel que atua como um precursor da fibrina.

Agora, pipete a suspensão do grânulo em uma placa de cultura contendo uma solução de trombina - uma enzima proteolítica - e incuba. A trombina se liga à molécula de fibrinogênio, fazendo com que sua clivagem forme monômeros de fibrina insolúveis, formando gel de fibrina polimérica. Esta etapa garante a incorporação de grânulos revestidos de células no gel de fibrina.

Em seguida, coloque uma cultura de fibroblastos - células precursoras do tecido conjuntivo - em cima do gel de fibrina e incube para permitir a ativação dos fibroblastos.

Durante a incubação, os fibroblastos secretam fatores de cres