Ensaio de alimentação de mosquitos: um método para avaliar os efeitos dos compostos de teste na mortalidade e fecundidade de mosquitos fêmeas adultas

Comece o ensaio de alimentação do mosquito preparando uma refeição de sangue, adicionando a concentração desejada de um composto de teste ativo no sangue de coelho desfibrinado. A refeição de sangue carece de fibrina, impedindo a coagulação do sangue.

Carregue esta refeição de sangue na porta de entrega de uma unidade de alimentação por membrana. Conecte-o a uma unidade de aquecimento, mantendo o sangue em uma temperatura ideal. Cubra a membrana com a solução de ácido láctico.

Coloque esta unidade em uma gaiola com mosquitos fêmeas adultas e pré-famintas para aumentar as chances de alimentação. Incubar no escuro. O ácido lático atrai mosquitos para a unidade de alimentação. As condições escuras os encorajam a se alimentar.

Transfira os mosquitos alimentados com sangue para uma câmara de crescimento. Após a digestão da refeição de sangue, o composto de teste ativo entra no corpo do mosquito, afetando vários órgãos e causando a morte de alguns.

Conte o número de mosquitos mortos e calcule a taxa de mortalidade. Avaliar o efeito do produto químico em estudo no sistema reprodutor dos mosquitos sobreviventes, introduzindo um copo para ovos na câmara.

Os mosquitos fêmeas utilizam proteínas da refeição de sangue e põem ovos, que são coletados dentro do copo. Conte o número de ovos, estimando a diminuição da fecundidade - capacidade de postura.

Alta mortalidade e baixa fecundidade correspondem à capacidade inseticida do composto.

Colete aproximadamente 150 mosquitos fêmeas adultas de quatro a cinco dias com um aspirador e transfira-os para uma gaiola separada. Remova a fonte de açúcar 1 a 24 horas antes do ensaio de alimentação.

Preparar uma solução-mãe de 80 milimolares da substância de ensaio em água. Em seguida, dilua-o em série com água para obter soluções de material de trabalho com as concentrações desejadas.

Para obter as concentrações de teste desejadas, adicione 40 microlitros de cada diluição a 960 microlitros de sangue de coelho desfibrinado em um tubo de 1,5 mililitro e misture por pipetagem. Coloque um filtro de membrana em uma unidade de alimentação e sele-o com um anel de borracha.

Em seguida, use uma pipeta para transferir 1 mililitro de sangue com solução de teste através da porta de entrega localizada no verso da unidade de alimentação. Conecte a unidade de alimentação a uma unidade de aquecimento. Em seguida, limpe a superfície da membrana suavemente com solução de ácido lático a 10% recém-preparada.

Coloque a unidade de alimentação na gaiola. Cubra a gaiola com um pano escuro e deixe os mosquitos se alimentarem por uma hora. Depois que os mosquitos se alimentarem, coloque a gaiola na geladeira a 4 graus Celsius por cinco minutos para anestesiar os mosquitos. Em seguida, conte e registre o número total de mosquitos na gaiola.

Ao examinar o abdômen, conte e registre o número total de mosquitos fêmeas total e parcialmente alimentados. Um mínimo de 50 mosquitos alimentados com sangue deve ser obtido por dose. Remova todos os mosquitos que não se alimentaram. Em seguida, transfira a gaiola para uma câmara de crescimento e use uma folha de pontuação para registrar o número de mosquitos mortos nos pontos de tempo apropriados.

No dia 3 após a alimentação com sangue, coloque um copo de ovo na gaiola por 72 horas. Use um microscópio de dissecação para contar o número total de ovos produzidos por tratamento.