Ensaio de lisado de amebócitos Limulus turbidimétrico: uma técnica para detectar e quantificar a contaminação por endotoxinas em medicamentos nanoformulados

A endotoxina, uma toxina bacteriana gram-negativa presente na membrana externa, é um lipopolissacarídeo, LPS, composto principalmente por lipídios e polissacarídeos, incluindo lipídios A e antígeno O. Quando liberado durante a infecção, é reconhecido pelo sistema imunológico, desencadeando respostas inflamatórias baseadas em citocinas.

Para estimar a contaminação por endotoxinas em uma nanoformulação de medicamento lipossomal usando o lisado de amebócitos Limulus, LAL, ensaio, prepare tubos de reação, um contendo o medicamento e outro contendo o medicamento enriquecido com uma concentração de endotoxina conhecida.

Adicione o reagente LAL contendo lisado de proteína obtido de caranguejo-ferradura, Limulus polyphemus, células sanguíneas ou amebócitos. O lisado inclui serina proteases inativas - fator B, fator C, enzima proclotante - e uma proteína coagulante em gel, coagulogênica.

Vortex os tubos e carregue-os em um turbidímetro para medir a turbidez das soluções.

Na presença de LPS contaminante ligado a drogas lipossomais, o fator C sensível ao LPS é ativado autocataliticamente, que então cliva e ativa o fator B que converte a enzima pró-coagulação em enzima de coagulação. Esta enzi