Ensaio de lisado de amebócitos de Limulus de coágulo de gel: um método para detecção de endotoxinas bacterianas em formulações de nanopartículas

A membrana externa das bactérias Gram-negativas contém endotoxinas chamadas lipopolissacarídeos, ou LPS. O LPS tem uma porção de oligossacarídeo hidrofílico e uma região lipídica A hidrofóbica.

Uma vez dentro do hospedeiro, as proteínas de ligação ao LPS reconhecem endotoxinas. Essas proteínas então se ligam aos receptores nas células imunes circulatórias. Essa ligação ativa as células imunológicas, que liberam fatores inflamatórios. A superprodução desses fatores exagera a resposta imune, causando a morte celular.

Para detectar endotoxinas usando o lisado de amebócitos Limulus, ou ensaio LAL, use uma formulação contendo endotoxinas ligadas à superfície lipofílica das nanopartículas por meio de suas porções hidrofóbicas de lipídios A.

Adicione o reagente LAL ao tubo. Este reagente é um lisado aquoso contendo enzimas inativas e proteínas derivadas dos amebócitos - células sanguíneas do caranguejo-ferradura.

Incube o tubo para facilitar a ligação de endotoxinas à proenzima fator C de coagulação inativa derivada do lisado, ativando-a autocataliticamente.

O fator C ativado cliva outra pró-enzima, o fator B, formando uma protease que cliva uma enzima pró-coagulação e a converte em uma f