Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Técnicas Biológicas
0 visualizações • 3:49 min. • July 8th, 2025
As enzimas degradadoras de carboidratos decompõem os polissacarídeos complexos em oligossacarídeos menores.
Para rastrear a atividade de degradação da enzima, comece tomando vários hidrogéis de polímero cromogênico, CPH, que são preparados tingindo polissacarídeos com corantes de clorotriazina de cores diferentes. Cada polissacarídeo é então quimicamente reticulado para formar hidrogel - um substrato sintético para a degradação enzimática.
Agora, dispense diferentes substratos de CPH em poços distintos de uma placa de reação porosa. Adicione uma solução de ativação e incube-a para garantir a ativação ideal dos substratos.
Coloque a placa de ensaio sobre uma placa de produto vazia. Centrifugue as placas juntas a uma velocidade baixa para facilitar a remoção eficiente da solução de ativação através dos poros da placa de reação.
Em seguida, suplemente todos os poços da placa de reação com o mesmo tipo de enzima degradadora de carboidratos em um tampão apropriado que mantenha um pH ideal para a atividade enzimática. Sele a placa e incube-a com agitação suave para permitir uma distribuição uniforme das enzimas na rede polimérica, permitindo que elas acessem o substrato.
Durante a incuba
Veja a transcrição completa e aceda a milhares de vídeos científicos