Ensaio de ligação de anexina V: uma técnica baseada em fluorescência para identificar eritrócitos apoptóticos por meio da marcação de fosfatidilserina

Durante certas condições patológicas, os eritrócitos ou glóbulos vermelhos sofrem encolhimento celular acompanhado pela translocação do fosfolipídio da membrana - fosfatidilserina - do folheto da membrana interna para a externa, levando à morte celular programada, eriptose, desencadeando fagocitose celular mediada por macrófagos.

Para medir a eriptose induzida por ionóforo em população isolada de eritrócitos humanos por meio do ensaio de ligação da Anexina V, comece com eritrócitos suspensos em um tampão livre de glicose.

A depleção de glicose induz estresse celular, ativando a proteína quinase C citosólica, que subsequentemente ativa os canais de cálcio e causa o influxo de íons cálcio. Além disso, os canais de potássio são ativados, causando efluxo de potássio e encolhimento celular.

Em seguida, adicione ionóforo de cálcio que forma um complexo estável com íons de cálcio extracelulares. O complexo facilita a entrada citosólica de íons de cálcio através da membrana celular, aumentando ainda mais a concentração intracelular de cálcio. Isso, por sua vez, ativa o scramblase - um transportador bidirecional de fosfolipídios - que auxilia na translocação da fosfatidilserina do folheto d