Ensaio de depleção de glicose in vitro: um método baseado em fluorescência para quantificar a captação de glicose celular por meio da medição da depleção de glicose extracelular

A glicose, uma fonte primária de energia celular, entra nas células por meio de proteínas transportadoras de glicose da membrana celular. A glicose é decomposta no citoplasma da célula em piruvato, através da via glicolítica, gerando energia através do trifosfato de adenosina, ou ATP, para o metabolismo celular.

Para medir a captação intracelular de glicose, comece com uma cultura aderente de fibroblastos em uma placa de vários poços. Substitua o meio por meio sem glicose e incuba. As células metabolizam a glicose disponível para produzir energia, atingindo um estado de falta de glicose.

Substitua o meio em um conjunto de poços por meios sem glicose contendo insulina, um estimulador de captação de glicose e desoxiglicose fluorescente, um análogo da glicose. Trate outro conjunto de poços com meios livres de glicose contendo desoxiglicose fluorescente.

Durante a incubação, a insulina estimula a translocação de transportadores adicionais de glicose para a membrana plasmática, facilitando o aumento da captação de desoxiglicose fluorescente, na ausência de glicose.

A desoxiglicose é fosforilada e não metabolizada pelas células. Ao mesmo tempo, a concentração extracelular de desoxiglicos