Medição da depleção análoga de glicose fluorescente extracelular: uma técnica de medição substituta para avaliar a captação de glicose em órgãos de camundongos ex vivo

Nos tecidos, a glicose extracelular entra nas células por meio de difusão facilitada por meio de transportadores específicos de glicose.

A glicose é decomposta em piruvato no citoplasma celular por meio da glicólise, uma via metabólica, gerando energia na forma de trifosfato de adenosina, ou ATP, para processos metabólicos celulares.

Para medir a captação de glicose ex vivo, comece com tecido hepático de camundongo de tamanho pequeno recém-colhido. Adicione tampão adequado para manter as condições fisiológicas.

Em seguida, transfira o tecido para uma placa de vários poços contendo meios livres de glicose. Em seguida, incubação em meio livre de glicose suplementado com desoxiglicose, um análogo de glicose marcado com fluorescência. O pequeno tamanho do tecido permite a entrada de desoxiglicose.

A desoxiglicose entra nas células através de transportadores de glicose, na ausência de glicose. Dentro das células, a desoxiglicose sofre fosforilação, mas não é metabolizada mais, levando ao seu acúmulo.

Colete a mídia contendo desoxiglicose marcada com fluorescência não utilizada nos pontos de tempo desejados. Usando um leitor de microplacas, meça a fluorescência da desoxiglicose extracelu