Ensaio de viabilidade da luciferase baseada em ATP: um método homogêneo para avaliar o potencial inibidor do crescimento de agentes de teste em organoides tumorais

O trifosfato de adenosina, ATP, a principal fonte de energia celular, é vital para diversas funções celulares. Sob estresse, os níveis de ATP intracelular são impactados negativamente, tornando o ATP um bom marcador para células viáveis e metabolicamente ativas.

Para começar, semeie a suspensão de células tumorais em uma microplaca de parede preta e fundo transparente para dispersão mínima de luz durante a medição da intensidade da luz. A microplaca consiste em um revestimento de hidrogel que impede que as células adiram à placa, permitindo a interação célula a célula e a automontagem em organoides tumorais - culturas de tecidos tridimensionais que imitam o microambiente tumoral.

Em seguida, trate com um composto de teste. O composto de teste interage com as células organoides e, dependendo de seu potencial inibidor de crescimento, pode interromper os processos metabólicos de produção de energia, resultando em depleção de ATP intracelular.

Após o tratamento, adicione um reagente de uma etapa composto por detergentes, inibidores da ATPase, a enzima luciferase, substrato específico da luciferase, luciferina e íons de magnésio. Incube pela duração desejada.

O detergente solubiliza as