Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Técnicas Biológicas
0 visualizações • 3:29 min. • July 8th, 2025
As células intestinais produzem espécies reativas de oxigênio - ROS. Níveis moderados de ROS mantêm a homeostase celular, enquanto altos níveis de ROS podem causar morte celular.
Para quantificar os níveis de ROS in vitro, comece com uma cultura de organoides 3D intestinais de camundongos. Esses organoides exibem arquitetura de epitélio intestinal com saliências semelhantes a criptas que abrigam células-tronco verdes que expressam fluorescência. Eles também contêm células diferenciadas semelhantes a vilosidades na periferia, circundando o lúmen central compreendendo células mortas e detritos. Todas essas células produzem diferentes níveis de ROS.
Agora, trate os organoides nos poços designados com moduladores ROS. Com base em sua natureza, os moduladores podem atuar como indutores ou inibidores de ROS. Depois de incubar pelo tempo necessário, remova o meio gasto.
Adicione uma enzima proteolítica à cultura, interrompendo a arquitetura 3D dos organoides e liberando diferentes células em suspensão. Em seguida, adicione uma sonda fluorogênica sensível a ROS e incuba.
Ao entrar nas células, as sondas reagem com ROS e são oxidadas para produzir fluorescência vermelha. Trate as células co
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