O ensaio de luciferase: um ensaio de alto rendimento para medir sinais luminescentes usando biorepórteres baseados em sistema de nanoluciferase projetados

A luciferase é uma enzima que oxida seu substrato para formar um produto bioluminescente.

Esta propriedade da luciferase é útil para projetar um sistema repórter baseado em nanoluciferase no qual a versão dividida da enzima é usada. Nesse sistema, os fragmentos menores e maiores possuem uma alta afinidade de ligação entre si e podem reconstituir a enzima funcional.

Para usar o sistema baseado em nanoluciferase para detectar a proteína-alvo - domínio de ligação ao receptor da glicoproteína spike SARS-CoV-2 - comece com uma placa de cultura contendo células aderentes. Essas células contêm um plasmídeo que codifica a proteína alvo em conjunto com uma sequência específica para o fragmento menor de nanoluciferase projetada.

Após a expressão, as células cultivadas produzem biorepórteres - proteínas-alvo recombinantes fundidas com o fragmento menor da luciferase. Trate as células com um tampão de lise e incube sob agitação. Os componentes tampão lisam rapidamente as células - liberando o conteúdo celular, incluindo os biorrepórteres, no sobrenadante.

Transfira o sobrenadante para uma placa de ensaio multipoços. Suplementar cada poço com a solução que contém os grandes fragmentos de nanolu