Ensaio Bioreporter: Uma técnica sensível usando um sistema repórter bioluminescente para detectar anticorpos SARS-CoV-2

Durante a infecção por coronavírus 2 da síndrome respiratória aguda grave, ou SARS-CoV-2, o domínio de ligação ao receptor da proteína spike do vírus, RBD, liga-se à enzima conversora de angiotensina 2 da célula hospedeira, ACE2, facilitando a entrada nas células virais. Em resposta, o sistema imunológico produz anticorpos que se ligam ao RBD viral e impedem a entrada celular, reduzindo a infectividade viral.

Para detectar anticorpos SARS-CoV-2 direcionados ao RBD, use uma suspensão recombinante de biorepórter composta por fragmentos de proteína de tamanho pequeno, fundidos ao RBD de pico SARS-CoV-2. Adicione anticorpos SARS-CoV-2 padrão direcionados ao RBD e esferas magnéticas de ligação a anticorpos.

Durante a incubação, a região do anticorpo Fc se liga aos domínios de ligação Fc dos grânulos. Além disso, o biorrepórter recombinante se liga aos anticorpos SARS-CoV-2 direcionados ao RBD ligados ao grânulo.

Pós-incubação, centrifugue a mistura. Remova o sobrenadante contendo biorepórter não vinculado. Ressuspenda os cordões encadernados no buffer. Transfira para uma placa de vários poços.

Adicione uma solução contendo fragmentos de proteínas de tamanho grande, com alta afinidade po