Ensaio de anticorpos neutralizantes AAV baseado em células: uma técnica colorimétrica para detectar anticorpos neutralizantes contra vírus adeno-associados específicos no soro

Vírus adeno-associados recombinantes, rAAVs, vírus de DNA de fita simples geneticamente modificados, não envelopados, são portadores de genes terapêuticos promissores.

Os rAAVs se ligam aos receptores da membrana celular alvo e sofrem endocitose mediada por clatrina, facilitando a entrega nuclear do genoma do rAAV e a expressão gênica terapêutica. No entanto, anticorpos neutralizantes do sistema imunológico direcionados contra rAAVs se ligam ao epítopo específico de rAAV, interferindo na ligação à membrana celular, na entrada celular e na transferência de genes.

Para detectar anticorpos neutralizantes contra rAAVs específicos no soro de ovelhas, primeiro obtenha concentrações adequadas de soro diluído. Adicione AAVs recombinantes que expressam a fosfatase alcalina placentária humana, hPLAP, gene. Permita que anticorpos neutralizantes se liguem e neutralizem AAVs.

Transfira esta mistura para os alvéolos de uma placa de vários poços contendo cultura de células epiteliais humanas aderentes. Após a incubação, os AAVs sofrem endocitose celular. As células transduzidas expressam hPLAP ligada à membrana celular. No entanto, os AAVs neutralizados não podem entrar nas células.

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