Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Técnicas Biológicas
0 visualizações • 3:03 min. • July 8th, 2025
A homeostase das proteínas celulares, ou proteostase, envolve a regulação do dobramento e função das proteínas, juntamente com a degradação das proteínas mal dobradas. Durante o envelhecimento, a maquinaria da proteostase diminui, fazendo com que proteínas mal dobradas se acumulem e se agreguem ainda mais, resultando em disfunção celular.
Para determinar o declínio da proteostase associado à idade, comece com Caenorhabditis elegans adultos transgênicos sincronizados com o desenvolvimento.
As células musculares desses vermes expressam proteínas com repetições de poliglutamina anormalmente expandida, ou polyQ, fundidas com uma etiqueta fluorescente. As proteínas PolyQ são propensas a dobramentos incorretos e, portanto, após o acúmulo, podem formar agregados.
Transfira os vermes para uma lâmina de microscópio composta por uma almofada de agarose e imobilize com um produto químico adequado para imagens de células vivas. Usando um microscópio de fluorescência, visualize os músculos da parede do corpo dos vermes durante um período de tempo para determinar os sinais de focos fluorescentes brilhantes, correspondentes aos agregados poliQ fluorescentes.
Em poucos dias, devido ao declínio da
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