Ensaio de co-incubação bacteriana: uma técnica baseada em microscopia de fluorescência para visualizar a competição bacteriana intraespecífica no nível de célula única

A competição intraespecífica entre duas cepas bacterianas faz com que a cepa inibidora libere moléculas efetoras tóxicas que matam a população-alvo.

Para visualizar as interações competitivas entre duas cepas bacterianas gram-negativas, comece com uma co-cultura composta por um inibidor e uma cepa-alvo em quantidades iguais.

Ambas as cepas são projetadas para expressar proteínas fluorescentes de cores diferentes para diferenciá-las visualmente durante a imagem. Concentre a cultura para maximizar o contato célula a célula entre as cepas bacterianas. Identifique a cultura mista em uma lamínula colocada no fundo de um prato.

Coloque uma almofada de agarose solidificada sobre o local, permitindo que as bactérias se imobilizem, e cubra-o com outra lamínula. Incubar para permitir o crescimento bacteriano, simulando condições de aglomeração bacteriana.

O envelope celular da cepa inibitória contém um sistema secretor especializado - o sistema de secreção tipo seis, ou T6SS. É composto por um complexo de membranas, uma placa de base e um tubo interno cercado por uma bainha contrátil.

Ao detectar o contato, a cepa inibidora ativa seu T6SS, que causa contração da bainha e expulsão do tubo, le