Ensaio de placa viral: uma técnica para medir o vírus herpes simplex infeccioso por meio da quantificação de placas formadas em monocamada de células infectadas por vírus

Para começar, prepare diluições em série do vírus herpes simplex, um vírus infeccioso envelopado, em buffer.

Obtenha uma placa de vários poços contendo uma monocamada de cultura de células epiteliais suscetíveis ao vírus. Substitua o volume específico de mídia por suspensões virais diluídas, garantindo uma cobertura uniforme em monocamada. Permita que o vírus seja adsorvido na superfície da célula.

Remova todos os vírus não adsorvidos. Cobrir a monocamada celular com meios contendo metilcelulose, formando uma camada semi-sólida.

Após a incubação, o envelope viral e a membrana celular se fundem, liberando o nucleocapsídeo viral envolvendo o genoma de fita dupla no citoplasma. Além disso, o genoma viral é liberado no núcleo da célula.

Usando a maquinaria celular do hospedeiro e a proteína do vírion, o genoma viral expressa proteínas virais precoces imediatas, que regulam a expressão de genes iniciais. As proteínas virais precoces medeiam a replicação do DNA viral.

Então, os genes virais tardios expressam proteínas estruturais, que junto com o genoma viral se reúnem para produzir partículas de vírion progênie. As células infectadas pelo vírus lisam, liberando vírions.

A metilcelulose