Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Técnicas Biológicas
0 visualizações • 4:48 min. • July 8th, 2025
Os macrófagos são células imunes especializadas que eliminam as células submetidas à apoptose - morte celular programada por fagocitose.
Para avaliar o engolfamento celular apoptótico, comece com uma lâmina de vidro contendo células embrionárias fixas de Drosophila, incluindo corpos apoptóticos engolfados por hemócitos - macrófagos invertebrados.
Primeiro, trate as células com um reagente bloqueador que bloqueie os locais não específicos. Adicione anticorpos primários que se ligam aos receptores de croquemort - marcadores fagocíticos de hemócitos. Lave o excesso de anticorpos.
Adicione anticorpos secundários marcados com fosfatase alcalina que se ligam aos anticorpos primários. Agora, adicione uma solução de substrato cromogênico apropriada na lâmina e incube. Durante a incubação, a fosfatase alcalina reage com o substrato cromogênico para produzir grânulos corados de roxo nos hemócitos.
Em seguida, adicione uma mistura de reação compreendendo desoxinucleotidil transferase terminal, enzima TdT e nucleotídeos ligados à digoxigenina. TdT catalisa a ligação de nucleotídeos ligados à digoxigenina às extremidades 3 'OH expostas do DNA fragmentado nos corpos apoptóticos.
Em seguida, adic
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